•          免疫系统是由各种细胞类型组成的复杂的网络，各种免疫细胞类型之间以及与组织实质细胞之间相互作用，在疾病发病机制中发挥核心作用，介导了免疫过程。scRNA由于只能获取转录本基因表达层面信息，还是不足以详细的刻画出组织内的免疫微环境。 scV(D)J利用独特建库方式，对样本进行转录组测序的同时，也可对T细胞与B细胞进行V(D)J区域测序，获得同一个细胞的基因表达信息与V(D)J序列信息，通过TCR/BCR的功能信息补充基因表达谱，从而更详细地了解不同T/B细胞群的行为，更加全面的方式了解免疫微环境的复杂性和多样性。

                高通量单细胞V(D)J测序技术能够在单细胞层面上，一次完成成千上万个单细胞的mRNA捕获，在获得每个细胞的全基因表达谱的同时，获得每个T淋巴细胞和B淋巴细胞的V(D)J基因表达信息。为满足“高通量”和“单细胞”的需求，高通量单细胞V(D)J测序主要借用液滴微流控芯片和带有分子标签的微球来实现。在液滴微流控芯片的加样孔中加入样本解离后得到的单细胞悬液，带有分子标签的微球，反转录试剂盒，以及液滴生成油。

    scV(D)J-seq

  • 靶向DNA切割原理

     

    1、利用mobivision软件质控并处理原始数据，同时生成下游分析的单细胞及V(D)J数据；

    2、利用R包Seurat进行单细胞数据质控、降维、聚类、差异表达分析等；

    3、利用R包scDblFinder去除双胞；

    4、利用R包Harmony进行样本整合,去除批次效应；

    5、利用R包monocle2 进行单细胞轨迹分析；

    6、利用R包scRepertoire进行单细胞免疫组库分析；

    7、借助R相关包实现数据统计、制图、差异分析及功能富集分析。

     

    分析流程

    技术流程

     

    1、制备单细胞悬液；

    2、液滴生成与细胞分选；

    3、细胞裂解和mRNA捕获；

    4、V(D)J区域特异性反转录；

    5、破乳和cDNA纯化；

    6、扩增V(D)J序列；

    7、加入测序接头和索引；

    8、PCR富集和片段选择；

    9、质控和上机测序。

  •         2022年10月22日，研究人员在Cell Discovery（IF=38）在线发表题为“Cellular basis of enhanced humoral immunity to SARS-CoV-2 upon homologous or heterologous booster vaccination analyzed by single-cell immune profiling”的研究论文，该研究表明单细胞免疫分析同源或异源加强疫苗接种增强SARS-CoV-2体液免疫的细胞基础。该研究对同源BBIBP-CorV/BBIBP-CorV或异源BBIBP-CorV/ZF2001方案的受体进行了6个月以上的增强剂量免疫后抗体应答的持久性和单细胞免疫谱进行了纵向研究。两种强化方案都显著提高了中和抗体的产生，抗体可以持续至少6个月。 大量单细胞5 ' mRNA和V(D)J测序(scRNA/V(D)J-seq)可以在单细胞分辨率下提供细胞异质性和免疫库多样性的景观视图。在此之前，这种方法已被用于BNT162b2疫苗诱导的抗原特异性CD8 T细胞应答。scRNA-seq和scV(D)J-seq共同有助于了解B和T细胞的克隆性、疫苗诱导的细胞表型和转录特征，对COVID-19的干预有很大的帮助。

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    1、新鲜组织，冰冻组织。

    2、组织保存液4℃运输，干冰运输。

    3、建议提供备份样品。

     

    注：具体送样细节，请咨询销售。

     

     

     

     

     

     

     

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