•     5'scRNA-seq测序技术采用全球领先的液滴式微流控芯片技术形成数十万个液滴，可对多种样本自动完成单细胞分离、细胞裂解、核酸捕获，是高质量、端到端的高通量单细胞测序建库系统。该技术利用了突破性的微球 — 分子标签技术，携带千万级别的分子标签，可针对多种样本的 mRNA 分子进行捕获并完成逆转录，确保构建的文库质量稳定、性能出色。

       在制备单细胞悬液后，通过 MobiNova®-100 平台对单细胞 mRNA 进行捕获，经过反转录生成 cDNA，将同一份 cDNA 分成两部分，分别构建二代测序文库和三代测序文库。通过二、三代测序优势互补，能够获得更加精细的细胞聚类、细胞注释、mRNA 全长序列及结构信息。

        单细胞 5' 转录组解决方案，实现了高通量、低成本的单细胞全长序列分析。该方案为科研人员发现新的细胞类型、研究细胞发育和分化的过程，以及探索各种疾病的发生机制提供新的研究工具。

    单细胞5'转录组测序

    产品优势

     

        5'单细胞转录组应用范围广泛，在识别细胞周期、肿瘤细胞异质性研究、鉴定罕见细胞类型、免疫细胞分型、干细胞分型、疾病分型等领域拥有极大的潜力，我们在整个实验流程及数据分析环节的关键节点进行了全面系统地优化，最大程度保证实验稳定性及数据的高效利用，可以帮助客户从容应对日益深入的科研需求，紧跟科研热点，从多个维度解析潜在的生物学信息。

  • 1、根据不同组织类型，选择合适的细胞悬液制备方案

    2、高通量单细胞建库平台

    3、完成单细胞捕获，并获得单细胞全长cDNA

    3、二代建库测序及分析

    4、Nanopore建库测序及分析

    分析流程

    靶向DNA切割原理

    技术流程

     

    1、细胞标签提取与纠错

    2、测序数据质控

    3、参考基因组对比

    4、基因定量

    5、生成表达矩阵

    6、生成可视化报告

     

    三代全长转录测序获得1.5-2万个基因的同时，转录本的种类可以达到5-8万种，平均每个基因有3-5条转录本

    PSCA（前列腺干细胞抗原基因）在单细胞二代测序的上皮细胞亚群中是泛表达，并未在左侧的恶性上皮中特异性表达，但是，PSCA的一条转录本，却是在左侧的恶性上皮细胞亚群中特异性表达。

  •   2023年发表在Cell的文章，题目为“Bacterial droplet-based single-cell RNA-seq reveals antibiotic-associated heterogeneous cellular states”。文章介绍了BacDrop，这是一种基于液滴的细菌单细胞RNA测序技术，可扩展到数百万个细菌细胞或数百个样本，并且可阐明由抗生素耐药性和持久性导致的不同表型结果相关的不同转录的细菌亚群。基于液滴微流控技术开发了BacDrop，利用10x Genomics平台，实现比基于平板方法更高的检测通量。与哺乳动物细胞相比，细菌的两个独特特征是，在保持RNA完整性的同时，裂解细菌细胞壁需要更苛刻的裂解条件，并且缺乏mRNA聚腺苷化的尾部，因此需要从更丰富的rRNA (95%)中分离mRNA (5%)。为了克服这些问题，作者采用了先前报道的细胞固定和渗透方案，以避免在液滴包封之前细胞的裂解，并分别使用RNase H和DNase I在渗透固定细胞内实施通用rRNA和基因组DNA (gDNA)移除步骤

     

       作者使用多编码策略克服基于液滴的单细胞方法中每个微流体通道可加载细胞数量受限的问题。其中使用两个编码的组合来唯一识别细胞：首先，“plate barcode”（CB1）作为预索引步骤，对应于通过逆转录（RT）获得的384种不同编码中的一种，其次，“液滴编码”（CB2）通过使用10x Genomics试剂盒唯一识别每个液滴，每个液滴包含3-6个细胞。CB1和CB2共同构成细胞编码。这种预索引策略最近已成功应用于哺乳动物scRNA-seq。通过预索引，能在每个液滴中装载多个细胞，从传统液滴scRNA-seq实验的平均液滴占用值（λ）~0.3显著增加至> 1。此外，与哺乳动物mRNA相比，细菌合成第二链cDNA的模板转换效率较低，因为细菌mRNA的5’端缺乏适当的修饰。因此，作者使用末端转移酶（TdT）将poly(A)尾附加到cDNA的3’端，以促进在液滴内合成第二链cDNA。

     

       作者使用多编码策略克服基于液滴的单细胞方法中每个微流体通道可加载细胞数量受限的问题。其中使用两个编码的组合来唯一识别细胞：首先，“plate barcode”（CB1）作为预索引步骤，对应于通过逆转录（RT）获得的384种不同编码中的一种，其次，“液滴编码”（CB2）通过使用10x Genomics试剂盒唯一识别每个液滴，每个液滴包含3-6个细胞。CB1和CB2共同构成细胞编码。这种预索引策略最近已成功应用于哺乳动物scRNA-seq。通过预索引，能在每个液滴中装载多个细胞，从传统液滴scRNA-seq实验的平均液滴占用值（λ）~0.3显著增加至> 1。此外，与哺乳动物mRNA相比，细菌合成第二链cDNA的模板转换效率较低，因为细菌mRNA的5’端缺乏适当的修饰。因此，作者使用末端转移酶（TdT）将poly(A)尾附加到cDNA的3’端，以促进在液滴内合成第二链cDNA。

     

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    新鲜组织样品

    1、人/小鼠，目标组织切取量≥0.4g；穿刺样本：人/小鼠，粗针进行采集，不少于3针。

    2、建议样品制备 1~2 份，组织保存液保存。4℃运输，48小时内送至实验室。

     

    新鲜细胞样品

    1、细胞量≥60万，通过镜检观察，判断细胞状态良好。

    2、建议样品制备 1~2 份，4℃运输，48小时内送至实验室。

     

     

     

    全血等样品

    1、全血≥5ml。

    2、运送介质：全血碎冰运输、冰袋运送（注意温度勿过低导致血液冻结）。建议样品制备 1~2 份。4℃运输，48小时内送至实验室。