•        UBS-seq通过高浓度亚硫酸氢铵试剂与 98℃极速反应，将亚硫酸氢盐转化效率提升 13 倍，解决了传统 BS-seq 反应耗时、核酸损伤（DNA 降解率 < 15%）及结构化区域转化不完全等问题。 该技术支持单细胞 / 1ng DNA/20ng RNA 等超微量样本，实现 DNA/RNA 中 5 - 甲基胞嘧啶（5mC）的单碱基分辨率检测。

            实验反应时间仅为传统方法的 1/13，样本起始量降低至单细胞水平，核酸损伤率减少 85% 以上，在干细胞分化、癌症标志物筛选（如早期结直肠癌 cfDNA 甲基化检测）及 mRNA 翻译调控机制解析中展现出高效性与可靠性，为表观遗传学研究提供了低损、精准的多组学分析工具。

     

    UBS-seq

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    对于获得下机测序数据后，分析流程如下：

    1.预处理：FastQC 评估 + cutseq 去杂，得 clean 数据。

    2.比对：HISAT2/Bowtie2 比对参考基因组/参考转录本，生成 BAM，UMI去重。

    3.位点识别：统计 甲基化 C 位点碱基。

    4.定量：计算修饰比例（甲基化 reads / 总 reads）。

    5.差异分析：methylkit 筛选显著位点。

    6.富集：clusterProfiler 做 GO/KEGG 分析。

    分析流程

     

    1、试剂配制：混合铵盐制备高浓度亚硫酸氢盐试剂。

    2、样本变性：样本与试剂混合，98°C 使核酸变性。

    3、快速转化：短时间（约 10 分钟）完成 C→U 转化。

    4、脱盐纯化：去除反应试剂及杂质。

    5、末端修复：修复核酸片段末端。

    6、接头连接：连接甲基化修饰接头。

    7、文库扩增：通过 PCR 扩增文库。

    8、质量检测：检测文库浓度、片段大小等。

    9、上机测序：进行高通量测序。

     

    文库构建

  •        超快速亚硫酸氢盐测序（UBS - seq）相关研究成果发表于《Nature Biotechnology》期刊，该期刊影响因子高达 68.164 ，发表时间为 2024 年 10 月 14 日，doi 号为 10.1038/s41587 - 024 - 02458 - 8 ，文章题目为 “Ultrarapid bisulfite sequencing for DNA and RNA 5 - methylcytosine detection” 。 在表观遗传学研究中，DNA 和 RNA 的甲基化修饰，尤其是 5 - 甲基胞嘧啶（5mC/m5C）的检测至关重要。传统的亚硫酸氢盐测序（BS - seq）作为金标准方法，存在反应时间长、样本损伤大、转化不完全等局限性，极大地限制了其在微量样本（如单细胞、游离 DNA）以及对检测时效性要求高的临床场景中的应用。UBS - seq 技术的出现，犹如一场及时雨，通过对试剂和反应条件的革新，成功克服了传统方法的诸多瓶颈，为甲基化检测带来了全新的解决方案。

          本研究开发了超快速亚硫酸氢盐测序（UBS-seq），通过高浓度铵盐亚硫酸氢盐试剂与 98°C 短时反应（10 分钟内），加速胞嘧啶转化 13 倍，减少 DNA/RNA 损伤与背景噪音。该技术可从单细胞、cfDNA 等低输入样本高效检测 DNA 5mC 与 RNA m5C，精准定位 mRNA 中 m5C 位点，发现 NSUN2 为 HeLa 细胞 mRNA 中～90% m5C 的主要甲基转移酶，且 m5C 在 5'-UTR 富集可能调控翻译。

         

  • 样本类型（不限物种）：

    1．Total RNA

    2．动物组织或者植物组织

    3．细胞样本

    注 ：具体送样细节 ，请咨询销售。

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