免疫沉淀 - 质谱联用技术IP-MS
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IP-MS（免疫沉淀 - 质谱联用技术）是研究蛋白质相互作用的核心手段之一，其原理是利用抗原抗体的特异性结合，先通过免疫沉淀捕获目标蛋白及其相互作用分子，再结合质谱技术对复合物中的蛋白质进行鉴定与分析。该技术整合了免疫沉淀的高特异性和质谱的高通量检测能力，能系统解析蛋白质间的相互作用网络，为理解生物过程的分子机制提供关键线索。 IP-MS 的实验流程主要包括样品制备、免疫沉淀和质谱分析三大步骤。首先通过细胞裂解获得总蛋白提取物，随后利用偶联抗体的磁珠或琼脂糖珠特异性吸附靶蛋白及其复合物，经多次洗涤去除非特异性结合的杂质后，对富集的蛋白进行酶解消化，生成的肽段通过液相色谱 - 质谱联用（LC-MS/MS）系统分离并鉴定，最终结合数据库匹配确定蛋白质组成及相对丰度。 该技术广泛应用于基础研究和转化医学领域，例如在信号通路解析中发现新的调控蛋白，在疾病机制研究中鉴定异常的蛋白质复合物，或在药物研发中验证候选靶点的相互作用分子。随着质谱灵敏度和定量精度的提升，IP-MS 已成为探索蛋白质组动态互作的重要工具，为揭示生命活动规律和疾病发生机制提供了强大支撑。
IP-MS
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1. 免疫沉淀 - 细胞裂解：PBS洗细胞，加3倍体积裂解缓冲液冰浴30min，离心取上清，定量后分装保存。 - 抗体偶联磁珠：磁珠洗涤后加抗体孵育，再洗涤备用。 - 共沉淀：裂解液加抗体磁珠孵育过夜，洗涤后洗脱，样本电泳染色取胶条。
2. 质谱检测 - 胶内酶解：胶条切粒，脱色、还原、烷基化后加胰酶孵育，提取肽段脱盐复溶。 - 质谱检测：肽段经液相分离，联用质谱仪以DDAPaSEF模式采集数据（扫描范围100-1700m/z）。
3. 数据分析 - 用SpectroMine软件按参数搜库。 - 进行韦恩图、GO、KEGG及PPI网络分析。 - 结果分类保存。
1. 免疫沉淀 - 细胞裂解：PBS洗细胞，加3倍体积裂解缓冲液冰浴30min，离心取上清，定量后分装保存。 - 抗体偶联磁珠：磁珠洗涤后加抗体孵育，再洗涤备用。 - 共沉淀：裂解液加抗体磁珠孵育过夜，洗涤后洗脱，样本电泳染色取胶条。
2. 质谱检测 - 胶内酶解：胶条切粒，脱色、还原、烷基化后加胰酶孵育，提取肽段脱盐复溶。 - 质谱检测：肽段经液相分离，联用质谱仪以DDAPaSEF模式采集数据（扫描范围100-1700m/z）。
3. 数据分析 - 用SpectroMine软件按参数搜库。 - 进行韦恩图、GO、KEGG及PPI网络分析。 - 结果分类保存。
实验流程
分析流程
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本文于2024年9月发表在International Journal of Biological Sciences杂志，影响因子9.2；本文的研究团队是来自首都医科大学的于新凤团队，该团队主要的研究方向是肿瘤侵袭转移机制及药物靶点发现。研究目的：本研究旨在探究PRDX1在结直肠癌中的作用及其分子机制，特别是其如何通过影响NRF2/GPX4信号通路抑制铁死亡，从而促进CRC的进展； 研究思路：本研究旨在探究PRDX1在结直肠癌中的作用及其分子机制，特别是其如何通过影响NRF2/GPX4信号通路抑制铁死亡，从而促进CRC的进展。
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1、细胞或组织。
2、干冰运输。
3、建议提供备份样品。
注：具体送样细节，请咨询销售。
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