温和超快 GLORI 2 .0 :
万细胞级样本 m 6 A 单碱基绝对定量技术
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GLORI 2.0是基于化学脱氨基反应的m6A单碱基绝对定量技术，创新采用“一锅法”化学反应，剔除传统G保护步骤，利用乙二醛与亚硝酸钠协同作用，在50°C下10分钟内将未甲基化腺苷高效转化为肌苷，完整保留m6A位点并以未转换A信号精准定位定量。硼酸缓冲体系维持温和pH，显著提升RNA完整性，使起始材料降至10,000细胞等效RNA（2 ng mRNA）。
该技术实现>99%的A-to-I转换率，合成RNA验证显示检测值与预期修饰水平线性相关（r=0.9992），生物学重复甲基化水平相关系数达0.95。
GLORI 2 .0
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GLORI-seq 生信分析流程：
1.去除接头（trim-galore）及去重（fastx-toolkit）
2.原始reads及清理后reads质控（fastqc）
3.准备分析用索引及注释，其中注释可选（GLORI-tools）
4.比对至索引、分析m6A位置、定量及注释（GLORI-tools）
5.计算修饰位点所在基因元件（bedtools、GUITAR）
6.m6A相关motif分析（HOMER）
7.差异分析（视样本情况而定）（methylKit），筛选标准：|meth_diff|>=10且p<0.05 8.组内修饰/差异修饰相关通路富集分析（clusterProfiler）
9.结果可视化（ggplot2）
10.结果验证
分析流程
GLORI - seq 流程如下：
1.G 保护（G Protection）：利用乙二醛（Glyoxal）对鸟嘌呤（G）进行保护处理，使其转化为 G’，避免后续反应中 G 被误修饰。
2.A 脱氨（A Deamination）：采用超快一锅法，加入 NaNO₂、乙二醛和 H₂O₂，在 10 分钟内对腺嘌呤（A）进行脱氨处理，使 A 转化为 A’。
3.G 去保护检测（G Deprotection Detection）：对已保护的 G’进行去保护处理并检测，通过分析 G 的最终状态，结合 A 的脱氨结果，实现 RNA 修饰位点的精准解析。
4.处理效果验证：通过电泳，对比未经处理（Untreated）与 GLORI 处理后的 RNA 样本，验证流程准确性与一致性，确保修饰位点分析可靠。
文库构建
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文章：Mild and ultrafast GLORI enables absolute quantification of m6A methylome from low-input samples
期刊：Nature Methods (IF 36.1)
Pub Date : 2025-05-05
DOI:10.1038/s41592-025-02680-9
在表观转录组学研究中，N⁶-甲基腺苷（m6A）作为真核生物mRNA中最丰富的修饰类型，其单碱基分辨率的精准定量对揭示基因表达调控机制至关重要。然而，传统技术在低输入样本兼容性、反应温和性及单碱基定量准确性上存在显著局限。GLORI 2.0作为基于化学脱氨基反应的新一代技术，通过创新“一锅法”流程突破了这些瓶颈——其剔除传统鸟嘌呤保护步骤，仅需10,000个细胞等效RNA（2 ng mRNA）即可在50°C下通过10分钟高效反应实现未甲基化腺苷向肌苷的超99%转化，同时完整保留m6A位点用于单碱基定位与绝对定量。该技术凭借硼酸缓冲体系维持RNA完整性，结合合成RNA验证的高线性相关性（r=0.9992）与生物学重复可靠性（r=0.95），不仅能在转录组范围检测超13万m6A位点，更可对低表达基因实现靶向精准分析，为神经突触组分、临床活检等稀缺样本的m6A研究提供了从单碱基精度到低输入场景的全面解决方案，引领表观转录组学研究迈向更高效率与精准度的新维度。
GLORI 2.0是基于一锅法化学脱氨基的m6A单碱基绝对定量技术，剔除G保护步骤，50°C下10分钟实现>99%未甲基化腺苷转肌苷，保留m6A位点。硼酸缓冲体系提升RNA完整性，支持10,000细胞级样本（2 ng mRNA）。检测值与预期修饰水平线性相关（r=0.9992），重复相关系数0.95。可检测超13万m6A位点，支持低表达基因靶向分析，为稀缺样本提供单碱基精度方案。
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样本类型（不限物种）：
1．Total RNA
2．动物组织或者植物组织
3．细胞样本
注 ：具体送样细节 ，请咨询销售。
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